Виды анализа на ВПЧ

Существует несколько видов анализов на определение ВПЧ. Для некоторых нужен забор крови, для других забор слизистых выделений. Ни один из анализов не является болезненным.

Для достоверного анализа пациентам важно соблюдать следующие условия:

1. Не проводить процедуру забора материала на анализ во время принятия антибиотиков или противовирусных препаратов. Лечение необходимо закончить за неделю до исследования
2. Неделю не пользоваться вагинальными медикаментами, если забор материала для анализа предстоит из влагалища
3. Воздерживаться от половых контактов за 2 суток перед проведением процедуры
4. за 2 дня до проведения процедуры не должно проводиться трансвагинальное УЗИ или кольпоскопия
5. Женщинам следует сдавать анализы не ранее чем через 5 дней после окончания менструации, лучше в первой половине цикла

Дополнительные условия подготовки к процедуре (если необходимо) сообщает специалист, который направляет на анализы.

ПЦР анализ

ПЦР (полимеразная цепная реакция) – анализ представляет собой исследование биологической жидкости на присутствие в ней ДНК вируса папилломы человека. Исследовать можно кровь, соскобы эпителия или поверхности слизистых.

ПЦР анализ на ВПЧ является достоверным и быстрым способом выявить наличие папилломавируса и определить его генотип. Полимеразная цепная реакция показывает наличие вируса, даже если он выделен в единичном количестве.

Отрицательный результат ПЦР-теста является нормой.

Генотипирование ВПЧ

Анализ проводится с целью выяснения, к какой группе вирусов относится выявленный. Все папилломавирусы разделены на группы по схожему генотипу – на филогенетические группы. Наиболее опасны группы: А9; А6-А7; А8.

Генотипирование ВПЧ – это определение генотипа вируса. Для каждого типа вируса проводится исследование по группам, затем индивидуальное определение генотипа.

Генотипирование позволяет:

• отслеживать заражение в динамике
• определять онкогенность
• определять несколько вирусов

Обратите внимание! Генотипирование ВПЧ особенно важно на фоне выявленной дисплазии шейки матки, поскольку позволяет определить хронический вид заражения

Анализ крови на ВПЧ

Диагностику по крови на ВПЧ проводят в профилактических целях или в случае подозрения на инфицирование, когда нет видимых проявлений.

Мазок на ВПЧ

Мазок на ВПЧ – это соскоб эпителия слизистой цервикального канала, влагалища, вульвы (для женщин) и уретральной слизи (для мужчин), взятой при помощи соскоба.

Для достоверности результата пациенту необходимо:

• Мужчинам – не мочится за два часа до процедуры
• Женщинам – не спринцеваться в день процедуры

При необходимости проводят анализ соскобов эпителия ануса, мазков из ротовой полости, горла. Техника проведения анализа – ПЦР тест.

Дайджин тест

Дайджин тест это международно признанный вид анализа на ПВЧ, который определяет наличие вируса, его онкогенность. Проводят анализ с целью профилактики и диагностики рака матки. Для анализа берется соскоб с поверхности шейки матки.

• низкоонкогенный вирус – тест №395
• высокоонкогенный тип вируса определяется тестом №394

Результат теста интерпретируется как:

• отрицательный – результат ниже 3 ед.
• сомнительный – от 3 до 5 ед.
• положительный – выше 5 ед.

Важно! У молодых женщин, даже при положительном высоком значении Дайджин теста повторное исследование назначают через 9 месяцев, не ставя сразу окончательного диагноза. У возрастных пациенток положительный тест №394 является возможным показателем устойчивого онкогенного вируса, что является показателем для дальнейшего исследования пациентки на предмет онкопатологии. https://www.youtube.com/embed/zcMhqo-cscc

Особенности анализа ВПЧ у женщин

Женщинам соскоб делает гинеколог на гинекологическом кресле. Процедура безболезненная, ничем не отличается от обычного профилактического осмотра. Цервикальный мазок проводится специальной щеточкой. Наиболее информативен соскоб с места видимого поражения тканей. Одновременно берут анализ на цитологию.

Обратите внимание! Женщинам, моложе 30 лет, анализ на ВПЧ проводят, но диагноз не ставят, а наблюдают в динамике. Молодой организм в большинстве случаев самостоятельно справляется с инфекцией

Особенности анализа у мужчин

Мужчинам процедуру проводит уролог, соскоб берется из уретры, с головки полового члена. При бессимптомном заражении обнаружить ВПЧ позволяет ПЦР тест, который показывает средне и высоко онкогенные папилломавирусы.

Существующие виды диагностики

При обнаружении на теле признаков деятельности ВПЧ доктор может направить на обследование с целью выявления факта заражения вирусом и определения его конкретного типа. Кроме того, рекомендуется сдать анализ на папилломавирусную инфекцию женщинам, планирующим беременность, а также в случае наличия у них проблем с вынашиванием плода. При этом диагностику проводят обоим партнёрам, поскольку если есть инфекция у одного из них, можно с очень большой степенью вероятности говорить о болезни и у второго.

В клинических лабораториях используют несколько методов для диагностики ВПЧ, определения его типа и оценки нанесённого ущерба организму. Из них стоит выделить:

• кольпоскопическое исследование;
• цитологическую диагностику;
• гистологическое обследование;
• ПЦР-тест.

Метод кольпоскопии

Этот вид исследования назначают женщинам с подозрением на наличие кондилом на шейке матки. Во время его проведения врач осматривает слизистые оболочки в области влагалища с помощью специального микроскопа. Благодаря многократному увеличению этого прибора, можно заметить мельчайшие образования. При расширенном исследовании задействуются также особые реактивы, которыми обрабатываются слизистые ткани. Благодаря им, можно на клеточном уровне выявить патологические изменения.

Цитологическое исследование

Чтобы провести эту процедуру для анализа на ВПЧ, у женщин берут мазок, содержащий эпителиальные клетки. Образец рассматривают под микроскопом. При этом основной целью является возможное выявление видоизменённых клеток, указывающих на наличие вирусной инфекции.

Такой метод довольно прост и не требует больших финансовых затрат. Однако главным его недостатком является высокий риск получения ложноотрицательных результатов. Заключение выдают спустя 5−7 дней. При этом на бланке указывают цифровой код: 1 свидетельствует об отсутствии поражённых клеток, 2 — о наличии изменённых клеток вследствие воспалительного процесса, 3 — сомнительный результат, а числа 4 и 5 говорят о наличии поражения вирусом.

Гистологический анализ

Это исследование назначают в качестве дополнительного метода после проведения кольпоскопии. Он ещё называется биопсией. Во время процедуры специалист берёт образец исследуемой ткани и передаёт его на изучение в лабораторию, где его тщательно рассматривают под микроскопом для оценки состояния поражённых клеток.

Применение гистологического исследования позволяет определить характер нароста, квалифицировав его как кондилому или же как опухоль. Результат обследования обычно выдают спустя три дня. В большинстве случаев после этого пациентку направляют на ПЦР-анализ для выявления конкретного штамма вируса.

Проведение ПЦР-теста

Исследование полимеразной цепной реакции (ПЦР) является одним из наиболее информативных методов диагностики, позволяющих выявить ДНК вируса даже при очень малой его концентрации в крови. Точность этого анализа на выявление ВПЧ составляет примерно 100%. Но на правильность результата может повлиять корректность техники проведения теста, в связи с чем стоит очень тщательно выбирать лабораторию, в которой строго соблюдаются все стандарты этого исследования.

Благодаря проведению ПЦР, можно определить точное количество вируса, находящегося в биоматериале. Если инфекцию не обнаружат, то это будет отмечено как отрицательный результат. В случае наличия ВПЧ, в лаборатории указывают его концентрацию на каждые 100 тыс. клеток. Если количество геномных эквивалентов (Lg):

• меньше 3 — свидетельствует о крайне малой концентрации вируса в биоматериале;
• от 3 до 5 — говорит о наличии клинически значимого количества инфекции;
• более 5 — указывает на высокую вирусную нагрузку.

Порядок скринингового обследования

Обследование женщины начинается с обычного приема врача-гинеколога. Он проводит осмотр, собирает анамнез, интересуется жалобами. На этом этапе могут быть обнаружены кондиломы и папилломы.

Во время осмотра врач берет мазок на ПЦР ВПЧ и мазок на цитологию (тест Папаниколау, ПАП-тест). Ниже мы подробнее рассмотрим суть этих исследований. Если результат ПЦР положителен, и выявлены изменения эпителия ШМ, женщина направляется на кольпоскопию – инструментальный осмотр для оценки состояния ШМ. О данном исследовании можно прочитать ниже.

Важно! Поскольку ВПЧ передается половым путем, при положительном результате анализа гинеколог посоветует партнерше женщины посетить уролога или дерматовенеролога для осмотра, сдать анализы

Что показывает ПАП-тест

Метод исследования шеечных мазков на наличие патологически измененных клеток придуман греческим врачом по фамилии Папаниколау еще в 30-х гг XX века. И сегодня он остается ведущим методом скрининговых исследований для выявления предраковых состояний ШМ и заражения ПВИ. Как упоминалось раньше, ВОЗ рекомендует здоровым женщинам проходить его раз в три года.

Считается, что в среднем персистирующая папилломавирусная инфекция, вызванная высокоонкогенным штаммом, способна переродиться в рак за 10-15 лет. Поэтому регулярные обследования защищают здоровье и жизнь женщины.

Мазки со свода влагалища, поверхности шейки матки и цервикального канала берутся специальными инструментами и наносятся на предметное стекло. Затем этот материал обрабатывается специальным составом, чтобы клетка не высохли и не деформировались, и окрашивается по методу Папаниколау. Окрашенные стекла отправляются в лабораторию на анализ.

Под микроскопом специалист изучает клетки, анализирует их форму и размер. По результатам этого исследования дается заключение, которое относит полученный материал к одному из пяти классов.

Таблица 1 представляет описание цитологических классов:

Класс 1	Норма, атипичных клеток нет.
Класс 2	Имеются клетки, измененные в результате воспаления слизистой, протекает воспалительный процесс, например, вызванный ЗППП. После лечения обычно мазок возвращается к норме.
Класс 3	Имеются единичные атипичные клетки, требуется уточнение диагноза с помощью других исследований или повтор теста через 4 месяца.
Класс 4	Обнаружены явно измененные клетки, что дает основания подозревать предраковое состояние или рак.
Класс 5	Зафиксировано большое количество измененных клеток.

В последних трех случаях женщину отправят на дальнейшее углубленное обследование, при классе 2 мазок нужно будет сдать повторно после лечения воспаления ШМ.

При папилломавирусной инфекции среди атипичных клеток обнаруживаются койлоциты (клетки, у которых вокруг ядра нетипичная светлая зона, а в цитоплазме присутствуют многочисленные вакуоли) и дискератоциты (элементы с необычно большим ядром).

Подготовка и стоимость исследования

Лучшие результаты ПАП-тест дает, если его проводить сразу после менструации. За 48 часов до исследования нужно исключить половые контакты. Нельзя пользоваться медикаментами для введения во влагалище (суппозитории, спермицидные контрацептивы), делать спринцевания.

Если имеются признаки инфекции (зуд, выделения), то сначала их нужно вылечить, затем проводить тест. Само исследование совершенно безболезненное и длится всего несколько минут вместе с осмотром.

ПАП-тест делается бесплатно (по полису ОМС) в любой гинекологии, но если есть желание получить максимально точные результаты, можно сделать тонкослойную жидкостную цитологию (более продвинутый метод) в частной клинике. Примерная цена в московских клиниках – 1500 рублей.

Как определить вирус ВПЧ

Для того, чтобы не допустить фатального развития событий, необходимо время от времени обследоваться на ВПЧ.

Если же выявлены подозрительные очаги, неважно, где – на шейке матки у женщин или на головке пениса у мужчин, необходимо идентифицировать тип возбудителя (их может быть и несколько) и определить количество вирионов. Количественный анализ ВПЧ также помогает составить прогноз по малигнизации (перерождению образования в рак) – чем больше копий онкогенного типа ВПЧ в образце, тем риск выше. Количественный анализ ВПЧ также помогает составить прогноз по малигнизации (перерождению образования в рак) – чем больше копий онкогенного типа ВПЧ в образце, тем риск выше

Количественный анализ ВПЧ также помогает составить прогноз по малигнизации (перерождению образования в рак) – чем больше копий онкогенного типа ВПЧ в образце, тем риск выше.

В современной дерматовенерологии может рекомендоваться сдать несколько видов анализов и тестов:

• Цитология. Это микроскопия клеток из подозрительного очага, может находить признаки рака. Не подходит для идентификации типа вирусов или ранней диагностики на стадии предраковых явлений.
• Кольпоскопия с обработкой очага уксусной кислотой, раствором Люголя. Позволяет точно установить границы поражения.
• Анализ ПЦР на ВПЧ. Прекрасный молекулярно-генетический метод, который мы рассмотрим немного ниже.
• Серологические тесты. Для клинической практики малоинформативны, их чаще используют для проведения эпидемиологических исследований по ВПЧ.

Во всем цивилизованном мире, ключевая роль в диагностике папилломавирусной инфекции отводится молекулярно-генетическим методам – ПЦР, Digene (дайджин) тест.

Полимеразно-цепная реакция

ПЦР – это полимеразная цепная реакция – вид анализа, применяемого для нахождения в биологическом материале уникальных фрагментов ДНК возбудителей ЗППП.

Метод основан на том, что при помощи специального аппарата и набора реактивов в диагностическом материале обнаруживают отдельные уникальные участки генома вирусов.

Таким образом с помощью анализа ПЦР можно отличить тип ВПЧ 16 от типа ВПЧ 18, а переключив оборудование на режим работы в реальном времени – получаем количественный подсчет обнаруженных возбудителей.

Методика обладает очень высокими показателями чувствительности и специфичности.

Положительный результат может быть получен даже если в образце будет всего 40 вирионов.

Обычно диагностический материал – мазок или соскоб из очага.

Проба для ПЦР на ВПЧ забирается из мочеиспускательного канала у мужчин, у женщин из уретры, влагалища, цервикального канала.

Кроме того, в качестве биологического материала для ПЦР может послужить сперма (семенная жидкость) или первая порция мочи.

Для последнего анализа необходимо взять три стакана и сделать так чтобы треть мочи от одного мочеиспускания оказалась в каждом стакане.

Содержимое первого стакана и будет первой порцией мочи.

Из мочеиспускательного канала образец забирается стерильным, одноразовым зондом.

У мужчин для того, чтобы взять мазок зонд заводят в уретру на 2-4 сантиметра, а у женщин на 0,5-1,5 сантиметра.

ПЦР мазка на ВПЧ готовится в течение суток.

Подготовка к анализу ПЦР на ВПЧ:

1. 1.Не посещать туалет 2-3 часа перед сдачей анализов. Моча не обладает антисептическим действием, но струя будет смывать с поверхности слизистой оболочки уретры возбудителей. Из-за этого возможен ложноотрицательный результат исследования.
2. 2.Не принимать антибиотиков за месяц перед исследованием.
3. 3.Не подмываться, а также не спринцеваться за день до анализа.
4. 4.Анализ ПЦР необходимо сдавать перед менструацией или через трое суток после ее окончания.
5. 5.За три дня необходимо не допускать половых актов.

1. 6.Не использовать влагалищных свеч, таблеток и противозачаточных (Фраатекс, Полижинакс и другие).

Обследованию может подвергаться и венозная кровь.

Анализ забирается натощак в лаборатории из локтевой вены.

Правда, оборудование и реактивы для анализа стоят не дешево и потому позволить себе проводить такие анализы на ВПЧ может не каждая лаборатория даже в Москве.

Что является основным методом диагностики соответствующих неопластических изменений?

Цитологическое исследование по Папаниколау соскоба (мазка) из цервикального канала (т.н. ПАП-тест, PAP).

Это в гинекологии одно из основополагающих скрининговых мероприятий.

Цитологические признаки ВПЧ-инфекции:

• койлоцитоз – появление характерно измененных при действии вируса клеток-койлоцитов, имеющих одно/несколько темных объемных ядер неправильной формы и с околоядерной светлой зоной, вакуолей;
• дискератоз – появление мелких поверхностных клеток-кератоцитов с темными ядрами и специфической цитоплазмой.

При выявлении клеточных изменений показаны:

• кольпоскопия с одновременной реализацией тестов с уксусной кислотой и Люголя раствором;
• гистологическое исследование – изучение образца тканей под микроскопом.

Признаком ВПЧ при кольпоскопии считаются:

• поглощение неравномерное раствора Люголя;
• жемчужная поверхность, белое окрашивание эпителия в тесте с уксусной кислотой (эпителий ацетобелый);
• выросты и пр.

Для установления конкретного типа вируса используется типирование посредством ПЦР.

ВКР-скрининг – что это такое и как проводится

ВКР-скрининг — массовая плановая диагностика на папилломавирус с целью раннего выявления. В исследовании на ВПЧ ВКР у женщин участвуют лица старше 25 лет (по некоторым данным – с 21 года/спустя 3 года после начала половой жизни; при сильной сексуальной активности, большом количестве партнеров – с 18 лет). Рекомендуется проходить 1 раз в 3 года в ходе диспансеризации. В процессе мероприятия выявляются вирусы высокого риска, представляющие опасность тем, что могут вызывать развитие рака шейки матки. Определение концентрации ДНК при ВПЧ высокого онкогенного риска проводится методом ПЦР.

Этапы скрининга:

• Мазок на цитологию по Папаниколау (ПАП-тест). Для проведения теста берут материал из канала шейки матки (зоны трансформации – места перехода цилиндрического эпителия в многослойный плоский) в ходе осмотра, который наносят на стекло/в емкость со специальной жидкостью (тогда забор мазка производят щеточкой). Затем материал после окрашивания изучают под микроскопом на наличие атипичных клеток, если они есть – тест положительный. Метод также называют цитологическим.
• ПЦР – определение наличия вируса. Реакцию проводят тем, у кого получен положительный результат ПАП-теста. Для исследования можно применять материал мазка, кровь, мочу.
• Расширенный скрининг – определение типа и количества ВПЧ высокого риска онкогенности (Дайджин-тест – число вирусных тел на 100тыс. клеток: до 3 – концентрация малая, 3-5 – средняя, больше 5 – высокая).

Забор материала осуществляют как для ПАП-теста.

Правила подготовки к сдаче

За 2 дня до проведения нужно воздержаться от секса

• За 2 дня до проведения нужно воздержаться от секса, приема любых медикаментов, спринцевания, вагинальных свечей, таблеток.
• Мазок на ПЦР сдают в первую фазу цикла, после менструации.
• В период обострения хронических инфекционных патологий, после приема антибиотиков забор материала не проводится.

Правила сдачи крови/мочи:

• Кровь – сдается из вены утром натощак, за несколько дней до анализа из рациона исключают аллергены (шоколад, цитрусовые и т.д.).
• Моча – для анализа ПЦР на ВПЧ нужно сдать натощак утреннюю мочу (последний прием пищи – 8 часов назад) в стерильный контейнер. Доставить контейнер в лабораторию нужно в течение 4 часов после забора материала.

Как сдавать мужчинам и женщинам

Отличается методика взятия мазка:

• Как сдавать анализ женщине – соскоб делается щеточкой, круговым поступательным движением из мочеиспускательного канала/ влагалища/цервикального канала.
• Мужчине – соскоб щеточкой делают с головки члена, мочеиспускательного канала.

Перед забором мазка нужно обеспечить соблюдение правил личной гигиены.

Расшифровка результатов

Трактовка полученных результатов проводится в зависимости от использованного метода:

• Качественный – наличие/отсутствие – “обнаружен”/”не обнаружен”.
• Генотипирование – обнаружение какого-либо конкретного штамма – “обнаружен”/”не обнаружен”.
• Комбинированный – обнаружение 16 штамма – “не обнаружен”, “обнаружен штамм 16”, “обнаружен ВПЧ, в том числе штамм 16”.
• Количественный:

Подсчет количества вирусных тел на 100 тыс. клеток биоматериала (соскоба):

• <3 – содержание низкое (вероятность рака низкая)
• 3-5 – средняя
• >5 – высокая (высокая вероятность рака)

Что такое Дайджен-тест (Digene HPV test)

В настоящее время широко применяется такой метод диагностики ВПЧ, как Digene HPV тест (Дайджен-тест).

Методика гинекологического осмотра была разработана компанией Digene Diagnostics (Murex) и основана на связывании вирусной ДНК с РНК-зондом. Для проведения Дайджен-теста используется любой материал, полученный при гинекологическом исследовании – соскоб клеток цервикального канала, влагалища, уретры, влагалища; предметные стекла для цитологического исследования, биоптат слизистой шейки матки.

Иначе эта диагностическая разработка называется «методом гибридного захвата» и ее суть состоит в том, что возможно выявить специфические фрагменты ДНК вируса папилломы человека, проведя дифференцированную диагностику между 2 группами генотипов вируса – высокого и низкого онкогенного риска. Однако определения типа мало – Дайджен-тест дает возможность выявить концентрации вируса в тканях шейки матки, что может служить очень важным прогностическим признаком.

Дайджен-тест получил очень широкое распространение благодаря надежности и простоте проведения. Кроме того, он повышает чувствительность проводимого ПАП-теста (мазка на онкоцитологию) – не зря проведение Дайджен-тестарекомендуется в том случае, если результаты теста по Папаниколау дают ложноположительный или сомнительный результат. На сегодняшний момент сочетанное проведение Digene HPV теста и цитологического исследования шейки матки является «золотым стандартом» диагностики предраковых и раковых изменений шейки матки у женщин старше 30 лет.

Дайджен-тест – единственный метод диагностики вируса папилломы человека высокого онкогенного риска, получивший одобрение и разрешение к использованию FDA – Управлением США по контролю за пищевыми продуктами и лекарствами. Также методика была одобрена Федеральной службой РФ по надзору в сфере здравоохранения и социального развития.

При положительном результате после проведения Дайджен-теста рекомендуется провести повторный тест через 6-9 месяцев. При двукратном положительном результате Дайджен-теста можно говорить о персистенции вируса папилломы человека – длительном присутствии вируса папилломы человека в организме. Это состояние опасно возможностью перехода в предраковые и раковые заболевания шейки матки. Отрицательный результат Дайджен-теста у женщин старше 30 лет требует повторного исследования через год.